中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究是中藥創(chuàng )新研究的重要內容，也是中藥現代化的重要任務(wù)之一，自“十一五”以來(lái)，國家科技部、國家發(fā)改委、國家中管局等對中藥大品種的二次開(kāi)發(fā)給予高度重視，并列入國家重要科技規劃和專(zhuān)項之中，在2014年科技獎勵大會(huì )上，“中藥二次開(kāi)發(fā)核心技術(shù)體系創(chuàng )研及產(chǎn)業(yè)化”項目獲國家科技進(jìn)步一等獎。中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究將是當前以致今后一個(gè)時(shí)期中藥創(chuàng )新研究的重要任務(wù)。

中藥大品種普遍存在基礎研究薄弱，藥效物質(zhì)基礎與作用機理不清楚，臨床作用特點(diǎn)不突出，質(zhì)量控制體系尚不完善，生產(chǎn)工藝落后，產(chǎn)品劑型單一、落后等問(wèn)題。促進(jìn)中藥制藥技術(shù)升級、培育中成藥大品種的最有效途徑是實(shí)施中成藥二次開(kāi)發(fā)戰略。通過(guò)二次開(kāi)發(fā)研究，一方面明確臨床定位，加強藥效物質(zhì)基礎及其作用機制研究，科學(xué)地闡釋中成藥的有效性和安全性；另一方面通過(guò)提升中藥制藥工藝品質(zhì)及制藥過(guò)程質(zhì)量控制技術(shù)水平，大幅度提高中成藥質(zhì)量標準，建立科學(xué)、嚴格和完整的中成藥質(zhì)量保障體系，確保中成藥質(zhì)量均一可控。通過(guò)中成藥二次開(kāi)發(fā)，可實(shí)現“優(yōu)勝劣汰”，擴大優(yōu)質(zhì)品種的市場(chǎng)占有率，促使中藥大品種成批涌現，推動(dòng)中藥產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。

疏風(fēng)解毒膠囊為治療急性上呼吸道感染屬風(fēng)熱證的中藥大品種，由虎杖、連翹、板藍根、柴胡、敗醬草、馬鞭草、蘆根、甘草八味中藥組成，具有疏風(fēng)清熱，解毒利咽的功效。元胡止痛滴丸為治療頭痛、痛經(jīng)及脅痛的中藥大品種，由延胡索和白芷二味藥組成，具有理氣、活血、止痛的作用，用于氣滯血瘀的胃痛、脅痛、頭痛及月經(jīng)痛等。本文以疏風(fēng)解毒膠囊和元胡止痛滴丸為例，論述中藥大品種核心價(jià)值發(fā)掘與品牌構建的思路、方法與研究實(shí)踐。

一、中藥大品種核心價(jià)值構成

見(jiàn)圖1.

圖1  中藥大品種核心價(jià)值構成分析

1科學(xué)價(jià)值

（1）闡釋中醫針對疾病的治法原理

中藥大品種是中醫理論的載體，是中醫臨床治療疾病的主要施用手段和形式。因此，大品種二次開(kāi)發(fā)首先闡釋中醫針對疾病的治法原理，是對中醫理論及中藥的臨床運用原理進(jìn)一步豐富和完善的過(guò)程。

（2）闡釋中醫理論的配伍原理

中藥大品種多為中藥復方制劑，而中藥復方的配伍原理是中醫理論的精髓，以中藥大品種為研究的模型藥物，通過(guò)配伍規律研究，是闡釋中醫藥配伍理論的可行路徑。

（3）闡明藥效物質(zhì)基礎和作用機理研究

中藥大品種是經(jīng)過(guò)多年臨床實(shí)踐，并通過(guò)大量臨床樣本檢驗證實(shí)的有效藥物，但其藥效物質(zhì)基礎和作用機理尚不完全清楚，通過(guò)二次開(kāi)發(fā)研究，以現代科學(xué)方法、客觀(guān)指標和實(shí)驗證據闡明其藥效物質(zhì)基礎和作用機理，在此基礎上建立科學(xué)的質(zhì)量控制方法，并指導臨床實(shí)踐。

2技術(shù)價(jià)值

中藥大品種核心技術(shù)價(jià)值主要反映一下4個(gè)方面：

（1）基于中醫理論和多組分藥物評價(jià)技術(shù)。中藥是一個(gè)復雜體系，按中醫理論指導進(jìn)行臨床運用，因此，其有效性、作用特點(diǎn)及適用人群的評價(jià)需具有針對性，尤其是反映中醫方-證對應、病-證兼顧、功能和主治均具的藥效學(xué)模型尤為重要；同時(shí)，中藥的作用機理研究仍處于探索階段，系統生物學(xué)、網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)、生物信息學(xué)等方法在闡釋中藥大品種作用機理方面發(fā)揮重要作用，通過(guò)中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究為中藥復雜體系療效特點(diǎn)、作用機理及配伍和理性研究探索可行研究路徑、方法和技術(shù)手段。

（2）制藥工藝技術(shù)。中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究的重要內容之一就是對制藥過(guò)程的改造、優(yōu)化和技術(shù)升級，通過(guò)二次開(kāi)發(fā)，建立質(zhì)量溯源的工藝體系，實(shí)現工藝參數優(yōu)化、在線(xiàn)監測等技術(shù)升級。

（3）中藥現代制劑和釋藥技術(shù)。制劑處方、工藝優(yōu)化和劑型改進(jìn)也是中藥大品種二次開(kāi)發(fā)的重要內容，其中，引進(jìn)和應用適宜的釋藥技術(shù)和新型制劑技術(shù)，并應用與中藥復方的復雜體系，對于推動(dòng)中藥現代制劑和釋藥技術(shù)的發(fā)展具有重要的意義。

（4）質(zhì)量控制技術(shù)。質(zhì)量標準提升研究是中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究的重要內容，通過(guò)質(zhì)量標準提升研究，建立可溯源的、與療效高度關(guān)聯(lián)的全程質(zhì)量控制系統和質(zhì)量標準，為中藥質(zhì)量控制提供可參照的模式和研究范例。

3臨床價(jià)值

主要體現在4個(gè)方面：

（1）通過(guò)二次開(kāi)打研究，進(jìn)一步評價(jià)、發(fā)現其臨床特點(diǎn)，聚焦和明確臨床定位。

（2）基于中醫理論，應用現代研究首段，闡明藥物干預原理，為臨床應用提供明確的理論和實(shí)驗依據。

（3）進(jìn)一步明確患者獲益。

（4）指導臨床實(shí)踐、實(shí)現更加精準用藥，提高臨床療效。

4經(jīng)濟價(jià)值

中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究，可促進(jìn)形成產(chǎn)品品牌，帶動(dòng)全產(chǎn)業(yè)鏈的發(fā)展，從而創(chuàng )造出重大的經(jīng)濟效益和社會(huì )效益。

二、中藥大品種受眾群體分析及二次開(kāi)發(fā)研究目的

1.中藥大品種受眾群體分析

見(jiàn)圖2.

圖2  中藥大品種受眾群體分析圖

2.中藥大品種二次開(kāi)發(fā)目的及對策

（1）為市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)、臨床醫生用藥以及患者消費提供理論依據和實(shí)驗證據

①以大品種為載體系統闡釋中藥的疾病干預原理、作用的特點(diǎn)、臨床優(yōu)勢以及組方配伍的科學(xué)內涵。

②明確其藥效物質(zhì)基礎和作用機理。

③發(fā)掘該品種的臨床價(jià)值，進(jìn)一步聚焦臨床定位，指導臨床應用，提高臨床療效。

④發(fā)現和提煉與同類(lèi)產(chǎn)品的比較優(yōu)勢，增強其與同類(lèi)品種的競爭力。提供市場(chǎng)拓展的理論與實(shí)驗題材，提高市場(chǎng)占有率。

（2）建立大品種技術(shù)群系，全面提升該產(chǎn)品的科技含量

①建立符合中藥特點(diǎn)的評價(jià)方法。

②建立有效的質(zhì)量控制方法,全面提升質(zhì)量標準。

③形成具有自主知識產(chǎn)權的技術(shù)群系，建立高端技術(shù)壁壘。

④促進(jìn)企業(yè)技術(shù)升級。

（3）為開(kāi)發(fā)換代產(chǎn)品提供研究證據

換代產(chǎn)品的研發(fā)也是中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究的重要內容，通過(guò)二次開(kāi)發(fā)研究對中藥大品種的藥效物質(zhì)基礎、作用機理、臨床特點(diǎn)和比較優(yōu)勢以及配伍規律等進(jìn)行的系統的研究，在此基礎上，在通過(guò)處方優(yōu)化、工藝改進(jìn)和劑型改進(jìn)，開(kāi)發(fā)形成換代升級產(chǎn)品。

三、中藥大品種價(jià)值品牌構建

通過(guò)二次開(kāi)發(fā)研究，構建中藥的品種核心價(jià)值品牌。見(jiàn)圖3。

圖3 中藥大品種價(jià)值品牌構建分析

四、中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究主要內容、方法和研究實(shí)例

中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究主要包括五個(gè)方面的內容：

（1）藥效物質(zhì)基礎研究；

（2）作用機理研究；

（3）作用特點(diǎn)、配伍合理性及比較優(yōu)勢研究；

（4）質(zhì)量標準提升研究；

（5）組方優(yōu)化、工藝精簡(jiǎn)及劑型改進(jìn)研究。見(jiàn)圖４。

圖4 中藥大品種二次開(kāi)發(fā)研究主要內容示意圖

1.藥效物質(zhì)基礎研究

中藥的臨床功效的表達方式是中藥研究的核心內容，而中藥的藥效物質(zhì)基礎及作用機理研究是揭示中藥的作用原理和臨床功效的表達方式的重要路徑。中藥的藥效物質(zhì)基礎及作用機理研究不但需要借助現代分析及化學(xué)生物學(xué)的研究方法，更重要的是必須依據中醫理論以及中醫藥對生命運動(dòng)規律以及藥物干預途徑的基本認識，既“源于中醫藥理論”又要“回歸中醫藥理論”。

（1）疏風(fēng)解毒膠囊化學(xué)物質(zhì)組的表征和辨識

目前，疏風(fēng)解毒膠囊未見(jiàn)化學(xué)成分研究報道，本課題組對疏風(fēng)解毒膠囊的化學(xué)物質(zhì)基礎進(jìn)行研究，通過(guò)HPLC-Q-TOF-MS/MS共識別了96個(gè)離子流色譜峰，分析確定了其中94個(gè)化合物：氨基酸7個(gè)，糖類(lèi)1個(gè)，環(huán)烯醚萜類(lèi)7個(gè)，苯乙醇苷類(lèi)11個(gè)，二苯乙烯類(lèi)1個(gè)，黃酮類(lèi)24個(gè)，木脂素類(lèi)6個(gè)，蒽醌類(lèi)6個(gè)，三萜類(lèi)18個(gè)，香豆素類(lèi)1個(gè)，生物堿類(lèi)5個(gè)，其他小分子化合物2個(gè)。對所有化合物分別進(jìn)行了藥材來(lái)源歸屬，結果分別來(lái)源于處方中的虎杖（12個(gè)）、連翹（18個(gè)）、板藍根（14個(gè)）、柴胡（8個(gè)）、敗醬草（14個(gè)）、馬鞭草（11個(gè)）、蘆根（5個(gè)）、甘草（21個(gè)）。

（2）入血成分及其代謝產(chǎn)物的辨識

采用血清藥物化學(xué)的方法，運用UPLC-Q/TOF-MS結合代謝組學(xué)的方法，快速地分析和鑒定了口服給予元胡止痛方后大鼠血漿和腦組織中的吸收原型成分及其代謝產(chǎn)物。見(jiàn)圖5。

圖5 偏最小二乘判別分析模型：（A）得分圖；（B）載荷圖；（C）離子變量線(xiàn)圖

從口服給予元胡止痛滴丸后大鼠血漿中鑒定出40個(gè)與元胡止痛滴丸相關(guān)的外源性化學(xué)成分，包括26個(gè)原型成分和14個(gè)代謝產(chǎn)物。其中15個(gè)原型成分同樣在給藥組大鼠腦組織中被檢測到，表明它們能夠穿過(guò)血腦屏障滲透進(jìn)入腦組織。在血漿尤其是腦組織中檢測到的吸收原型成分和代謝產(chǎn)物，可能是真正的活性成分并與元胡止痛方的藥理活性直接相關(guān)。這些將為元胡止痛方的藥理學(xué)和分子水平作用機制的進(jìn)一步研究提供有用信息。

通過(guò)上述研究基本闡明了元胡止痛滴丸的化學(xué)物質(zhì)組、入血成分及其代謝產(chǎn)物。

（3）藥效物質(zhì)基礎的篩選和確認

①基于核心藥效學(xué)指標的藥效物質(zhì)基礎的確認-抗炎藥效物質(zhì)基礎的篩選

采用UPLC/Q-TOF-MS整合NF-κB雙熒光素酶報告基因系統的篩選體系，快速準確地篩選鑒定疏風(fēng)解毒膠囊中潛在的抗炎活性成分，明確其抗炎藥效物質(zhì)基礎。通過(guò)活性篩選實(shí)驗，確定了10個(gè)活性單體，按照結構類(lèi)型分類(lèi)，主要有苯乙醇苷類(lèi)（連翹酯苷E、連翹酯苷A、異連翹酯苷A、毛蕊花糖苷）、環(huán)烯醚萜苷類(lèi)（戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷）、木脂素類(lèi)（連翹苷）、黃酮類(lèi)（3-羥基光甘草酚、牡荊苷）和蒽醌類(lèi)（大黃素）化合物。見(jiàn)圖6。

（A: 254nm下紫外譜圖；B: 正模式質(zhì)譜圖；C: 負模式質(zhì)譜圖；D: NF-κB抑制率圖）

圖6 疏風(fēng)解毒膠囊UPLC/Q-TOF及生物活性分析

以原代小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象，對篩選結果進(jìn)行驗證試驗。建立了LPS誘導的炎癥模型，在體外細胞水平上評價(jià)馬鞭草苷、連翹酯苷A、連翹苷、牡荊苷、大黃素五個(gè)單體化合物的抗炎效果。結果表明，五個(gè)化合物的干預能顯著(zhù)地抑制原代小鼠腹腔巨噬細胞中LPS誘導的TNF-α、IL-6的表達水平，并且呈現一定的劑量依賴(lài)關(guān)系，驗證了五個(gè)單體化合物的抗炎效果。

②基于“性-效-物”三元論的藥效物質(zhì)基礎的表征和確認

a.基于味覺(jué)、嗅覺(jué)受體分子對接的“性（味）”物質(zhì)基礎虛擬篩選和確定

基于藥物分子-味覺(jué)（嗅覺(jué)）受體結合理論，運用計算機虛擬篩選方法進(jìn)行“性（味）”物質(zhì)基礎篩選。以延胡索和白芷代表性化合物為小分子配體庫，進(jìn)行hTAS2R10苦味受體對接篩選，其結果與陽(yáng)性配體奎寧的對接結果比較發(fā)現，原小檗堿型的代表性化合物延胡索乙素與構建的苦味受體hTAS2R10的親和力較強，而原托品堿類(lèi)成分對接結果較差，故推測原小檗堿型化合物可能為延胡索藥材中的苦味成分。對接結果見(jiàn)圖7。

圖7 hTAS2R10與延胡索乙素（A）和原阿片堿（B）結合模式圖

以延胡索和白芷代表性化合物為小分子配體庫，進(jìn)行OR7D4辛味受體對接篩選，其結果與陽(yáng)性配體辣椒素對接打分比較發(fā)現，延胡索乙素、原阿片堿、歐前胡素與OR7D4的對接得分均高于辣椒素，初步推測其可能為辛味物質(zhì)基礎。對接結果見(jiàn)圖8。

圖8 or7D4與歐前胡素（A）、延胡索乙素（B）和原阿片堿（C）結合模式圖

b.基于G蛋白偶聯(lián)受體“功效五味”的物質(zhì)基礎篩選和確定

中藥的“五味”具有功效的內涵，如辛“能散、能行”，甘“能補、能緩、能和”，酸“能收、能澀”，苦“能泄、能燥、能堅”，咸“能下、能軟”。并與四氣、升降浮沉、歸經(jīng)等藥性理論存在復雜的內在聯(lián)系。

G蛋白偶聯(lián)受體是一大類(lèi)膜蛋白受體的統稱(chēng)。這類(lèi)受體參與了很多細胞信號轉導過(guò)程。在這些過(guò)程中，G蛋白偶聯(lián)受體能結合細胞周?chē)�環(huán)境中的化學(xué)物質(zhì)并激活細胞內的一系列信號通路，最終引起細胞狀態(tài)的改變。與G蛋白偶聯(lián)受體相關(guān)的疾病為數眾多，并且大約40%的現代藥物都以G蛋白偶聯(lián)受體作為靶點(diǎn)。應用胞內鈣離子濃度變化熒光技術(shù)，對延胡索、白芷藥材及其主要成分進(jìn)行G蛋白偶聯(lián)受體結合實(shí)驗，結果見(jiàn)圖9。

圖9 延胡索、原阿片堿、巴馬汀及延胡索乙素對6個(gè)GPCRs受體的激動(dòng)和拮抗作用

結果表明：延胡索、白芷藥材均可作用于多個(gè)相關(guān)功能受體，且二者配伍后效果優(yōu)于單一給藥；原小檗堿類(lèi)延胡索乙素和原阿片堿類(lèi)原阿片堿可作用于與辛、苦味相關(guān)的功能受體，故可能為辛、苦味物質(zhì)基礎；香豆素類(lèi)歐前胡素可拮抗血栓素受體，體現了辛味活血化瘀的功效，其可能為辛味成分。延胡索和白芷配伍后可以通過(guò)激活5-HT1A、OPRM1、ADRB2受體，抑制D2、M2和TP受體來(lái)調節一系列的下游生物信號轉導效應，從而發(fā)揮多種生物活性，產(chǎn)生增效作用。延胡索乙素和歐前胡素配伍后可以通過(guò)激活ADRB2受體，抑制D2和TP受體來(lái)調節下游生物信號通路，從而發(fā)揮多種生物活性，產(chǎn)生增效作用。

2.作用機理研究

（1）整體動(dòng)物模型—疏風(fēng)解毒膠囊解熱作用研究

采用酵母致大鼠發(fā)熱模型，研究疏風(fēng)解毒膠囊解熱作用，結果顯示，造模后5h、6h，模型組與對照組比較，體溫顯著(zhù)性升高，說(shuō)明造模成功。結果顯示，造模后5h，模型組與對照比較，大鼠肛溫有非常顯著(zhù)性的升高，說(shuō)明造模成功。與模型組比較，疏風(fēng)解毒膠囊高、低劑量組大鼠肛溫有顯著(zhù)性的降低，表明疏風(fēng)解毒膠囊有顯著(zhù)的解熱作用。

采用酵母致大鼠發(fā)熱模型，研究疏風(fēng)解毒膠囊給藥后對體溫調節相關(guān)因子IL -1α、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、PGE2、cAMP、cGMP、Na-K-ATPase、IL-6、AVP的影響。結果：疏風(fēng)解毒膠囊能顯著(zhù)降低炎癥因子PGE2及細胞因子TNF-α、IL-6、IL -1α、IL-1β水平，顯著(zhù)降低致熱介質(zhì)cAMP及cAMP/cGMP水平，顯著(zhù)降低Na-K-ATPase，減少產(chǎn)熱，顯著(zhù)升高內源性解熱介質(zhì)AVP的含量。疏風(fēng)解毒膠囊抑制PGE2、TNF-α作用弱于阿司匹林，增加AVP、cAMP/cGMP作用強于阿司匹林。結果表明疏風(fēng)解毒膠囊能顯著(zhù)抑制炎癥因子PGE2產(chǎn)生，從而顯著(zhù)抑制致熱性細胞因子TNF-α、IL -1α、IL-1β、IL-6的生成,進(jìn)而減少產(chǎn)熱因子cAMP、Na-K-ATPase等含量，降低cAMP/cGMP，減少產(chǎn)熱，并使內源性解熱介質(zhì)AVP含量增加，從而發(fā)揮其解熱作用。

（2）基于抗炎網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)的作用機理研究

對篩選鑒定出的10個(gè)抗炎活性單體（連翹酯苷E、連翹酯苷A、異連翹酯苷A、毛蕊花糖苷、戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷、連翹苷、3-羥基光甘草酚、牡荊苷、大黃素）利用PharmMapper和KEGG等進(jìn)行靶點(diǎn)及作用通路分析，結果表明，這10個(gè)成分可能通過(guò)HRAS、PDPK1等31個(gè)靶點(diǎn)作用于炎癥反應的MAPK、VEGF等19條通路，這些信號通路與炎癥、膠原形成和肌肉收縮相關(guān)。利用Cytoscape 2.6軟件繪制疏風(fēng)解毒膠囊的抗炎網(wǎng)絡(luò )藥理圖（圖10）。

結果顯示，環(huán)烯醚萜苷類(lèi)化合物馬鞭草苷和戟葉馬鞭草苷以及苯乙醇苷類(lèi)化合物連翹酯苷A和毛蕊花糖苷通過(guò)與相應的靶蛋白結合主要作用于和炎癥、免疫、膠原蛋白形成、肌肉收縮相關(guān)的信號通路，從而起到抗炎、免疫調節、和鎮咳的作用；木脂素類(lèi)化合物連翹苷、黃酮類(lèi)化合物牡荊苷、蒽醌類(lèi)化合物大黃素主要作用于和炎癥以及免疫相關(guān)的通路而起到抗炎和免疫調節的作用；連翹酯苷E和3-羥基光甘草酚則主要通過(guò)作用于炎癥通路起到基礎抗炎的作用。由此推測，馬鞭草苷、戟葉馬鞭草苷、連翹酯苷A和毛蕊花糖苷是最重要的藥效物質(zhì)。

（3）對小鼠急性肺炎模型基因組學(xué)研究

通過(guò)對急性肺炎小鼠給藥前后基因組比較分析，疏風(fēng)解毒膠囊預給藥2周后，能顯著(zhù)降低急性上呼吸道感染造成的IL-6、IL-8等炎癥因子的表達升高，減少肺粒細胞浸潤，改善肺部組織水腫、壞死脫落；基因芯片篩查結果（見(jiàn)圖11）顯示藥物干預組有70個(gè)基因與模型組有顯著(zhù)差異，涉及84條作用通路。

圖11  疏風(fēng)解毒膠囊對急性肺炎小鼠基因表達譜的影響

（4）代謝組學(xué)研究

采用UPLC-Q-TOF-MS法，建立了大鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型的代謝輪廓分析。復制腹腔注射縮宮素誘發(fā)大鼠痛經(jīng)模型，分離血清做PGF2α的生化檢測，血漿做UPLC-Q-TOF-MS的無(wú)靶向代謝組學(xué)分析。通過(guò)多元統計分析，從痛經(jīng)模型大鼠血漿中篩選出蘇氨酸、纈氨酸、磷酰膽堿、植物鞘氨醇、LPC18:3、LPC18:0等19個(gè)與大鼠痛經(jīng)模型有關(guān)的生物標記物。代謝通路分析表明，這些標記物主要存在于三條代謝通路中，分別為甘油磷脂代謝、氨基酸類(lèi)代謝和鞘脂類(lèi)代謝。

通過(guò)以上研究，基本明確了疏風(fēng)解毒膠囊的藥效物質(zhì)基礎，初步闡釋了疏風(fēng)解毒膠囊的作用機理，揭示了其多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的網(wǎng)絡(luò )作用特點(diǎn)，對于詮釋中醫治肺理論有一定的借鑒意義，并為制定疏風(fēng)解毒膠囊質(zhì)量控制標準及臨床應用提供了理論和實(shí)驗依據。

3.質(zhì)量標準提升研究

（1）基于藥材形成全過(guò)程的藥材質(zhì)量標準體系的建立

中藥原料藥材大多為來(lái)源于自然界的動(dòng)植物有機體，與自然界存在千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系，并遵循生物遺傳和變異的基本規律。在藥材基原個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，形成其質(zhì)量的基本內容，因此，藥材質(zhì)量是由其種質(zhì)的遺傳物質(zhì)基礎及其個(gè)體發(fā)育過(guò)程中的生態(tài)（環(huán)境）歷程所決定的。藥材質(zhì)量的表達具有多維性和多重性的特點(diǎn)，既反映在形態(tài)和化學(xué)物質(zhì)組群等方面，又有藥效和藥性的兩方面的基本內涵，并且，最終以方劑的形式在臨床上體現。

本文基于藥材形成的全過(guò)程，提出從藥材基原的形態(tài)統計學(xué)分析分類(lèi)鑒定-藥材取樣-有效部位確定的藥效學(xué)研究-有效成分代謝及體內過(guò)程研究-藥效物質(zhì)基礎研究及質(zhì)量控制指標的確定-含量測定-指紋圖譜研究-譜效關(guān)系研究-質(zhì)量評價(jià)等質(zhì)量分析的全過(guò)程的中藥質(zhì)量分析技術(shù)方法和系統的評價(jià)體系，構建中藥質(zhì)量分析規范性研究技術(shù)，最終提出科學(xué)、規范、適合推廣應用的技術(shù)方法和系統的評價(jià)體系（圖14）。

圖14 中藥材質(zhì)量研究及質(zhì)量標準建立技術(shù)體系

本項目對疏風(fēng)解毒膠囊原料藥材進(jìn)行質(zhì)量標準提升研究。首先，對虎杖、連翹、板藍根、柴胡、敗醬草、馬鞭草、蘆根、甘草8味藥材進(jìn)行了化學(xué)成分研究，通過(guò)液質(zhì)指認分析，確定了虎杖等藥材中共184個(gè)化合物；進(jìn)一步建立了以上8味組成藥材HPLC指紋圖譜評價(jià)體系，通過(guò)系統聚類(lèi)分析和相似度評價(jià)系統建立各個(gè)藥材對照指紋圖譜共有模式，對每個(gè)藥材的14批樣品采用指紋圖譜的方法進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)；建立了馬鞭草藥材中戟馬鞭草苷、馬鞭草苷、毛蕊花糖苷三個(gè)成分的含量測定方法，方法簡(jiǎn)便、準確，重復性好。采用建立的方法對14批藥材進(jìn)行了測定；并照中國藥典2010年版一部中虎杖、連翹、甘草、柴胡、板藍根的含量測定方法，測定了5味藥材共70批次的含量。對疏風(fēng)解毒膠囊原料藥材的質(zhì)量標準進(jìn)行了全面的提升。

（2）復方中藥質(zhì)量控制模式的建立

中藥質(zhì)量控制及質(zhì)量標準的根本目的是對中藥的有效性、安全性及質(zhì)量的一致性進(jìn)行有效的控制。因此，質(zhì)量控制指標與其安全性、有效性的關(guān)聯(lián)度至關(guān)重要。中藥成分復雜，各成分具有不同的生物活性，各成分之間在疾病生命系統中表現復雜的關(guān)聯(lián)規律，體現“多重藥理功效”特點(diǎn)，這也是中藥復方配伍原理和中藥干預疾病的特色和優(yōu)勢的核心所在。因此，建立復方中藥質(zhì)量控制的科學(xué)模式，首先要通過(guò)中藥化學(xué)物質(zhì)組與其生物效應表達相關(guān)性研究，確定質(zhì)量控制的核心指標，進(jìn)而以質(zhì)量要素完整性表達的技術(shù)方法建立系統、全面的質(zhì)量控制體系。見(jiàn)圖15。

本項目在對疏風(fēng)解毒膠囊藥效作用及作用機理研究、藥效物質(zhì)基礎研究、血中移行成分研究、網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)研究和有效成分體內代謝研究的基礎上，確定質(zhì)量控制指標，建立了多指標成分含量測定方法和指紋圖譜方法，對該藥質(zhì)量標準進(jìn)行全面提升。

圖15 復方中藥質(zhì)量研究模式

①疏風(fēng)解毒膠囊化學(xué)成分分析及藥效物質(zhì)基礎的確定

選用與疏風(fēng)解毒膠囊功能主治相吻合的體外抗炎藥理模型，對疏風(fēng)解毒膠囊指紋圖譜與體外抗炎藥效作用進(jìn)行了有效成分分析及藥效物質(zhì)基礎的研究，結果表明其中10個(gè)色譜峰對應的化學(xué)成分對NF-κB表達有顯著(zhù)的抑制作用，通過(guò)HPLC/MS進(jìn)行指認，確定了10個(gè)色譜峰對應的化學(xué)成分為連翹酯苷E、戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷、連翹酯苷A、毛蕊花糖苷、異連翹酯苷A、連翹苷、3-羥基光甘草酚、牡荊苷、大黃素，這為確定疏風(fēng)解毒膠囊的藥效物質(zhì)基礎和質(zhì)量控制研究提供參考依據。

②疏風(fēng)解毒膠囊多指標成分含量測定

依據篩選鑒定疏風(fēng)解毒膠囊中潛在的抗炎活性成分，明確其抗炎藥效物質(zhì)基礎主要有苯乙醇苷類(lèi)（連翹酯苷E、連翹酯苷A、異連翹酯苷A、毛蕊花糖苷）、環(huán)烯醚萜苷類(lèi)（戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷）、木脂素類(lèi)（連翹苷）、黃酮類(lèi)（3-羥基光甘草酚、牡荊苷）和蒽醌類(lèi)（大黃素）化合物。在此基礎上建立了疏風(fēng)解毒膠囊HPLC多指標成分含量測定的方法，在同一色譜條件下同時(shí)測定虎杖苷、大黃素、連翹酯苷A、戟葉馬鞭草苷、馬鞭草苷、毛蕊花糖苷、甘草酸7個(gè)有效成分種成分的方法，該方法簡(jiǎn)便、快捷、重復性好、可同時(shí)測定7種成分。建立了基于“有效性”的本品定量控制標準，以保證本品的有效性及其穩定均一性。為本品質(zhì)量控制提供了保障。對近年的14批疏風(fēng)解毒膠囊中的7種成分進(jìn)行了含量測定。

圖16  14批疏風(fēng)解毒膠囊中的7種主要成分含量測定結果

③疏風(fēng)解毒膠囊指紋圖譜研究

研究建立了疏風(fēng)解毒膠囊指紋圖譜質(zhì)量控制分析方法，采用所建立的方法對14批疏風(fēng)解毒膠囊樣品進(jìn)行了指紋圖譜測定，采用相似度、聚類(lèi)分析及主成分分析等數據處理方法對指紋圖譜的模式識別研究，確定22個(gè)共有峰，以21號峰為參照物峰，建立標準指紋圖譜（圖17）。

圖17  疏風(fēng)解毒膠囊HPLC標準指紋圖譜

通過(guò)疏風(fēng)解毒膠囊、全方藥材及相應的陰性樣品指紋圖譜進(jìn)行對照研究，對疏風(fēng)解毒膠囊HPLC指紋圖譜22個(gè)共有特征峰中的20個(gè)特征峰的來(lái)源進(jìn)行了歸屬，其中來(lái)自于虎杖（8個(gè)）、連翹（6個(gè)）、馬鞭草（3個(gè)）、敗醬草（1個(gè)）、甘草（2個(gè)）；通過(guò)采用對照品及采用HPLC-MS法對色譜峰進(jìn)行了指認，分別為大黃酚、大黃素-8-O-葡萄糖苷、大黃酸、連翹酯苷E、戟馬鞭草苷、馬鞭草苷、虎杖苷、甘草苷、連翹酯苷A、羥基化連翹酯苷A、毛蕊花糖苷、異連翹酯苷A、白藜蘆醇、3-羥基光甘草酚、牡荊苷、Gancaonin G、異甘草苷、甘草素、芒柄花素、uralenol、大黃素、蘆薈大黃素。

綜上所述，本研究從質(zhì)量要素完整性表達及質(zhì)量控制全過(guò)程的角度，通過(guò)化學(xué)成分研究、藥效物質(zhì)基礎及質(zhì)控指標的確定、多指標含量測定、指紋圖譜等質(zhì)控手段和方法，建立了從藥材到成品的全過(guò)程的質(zhì)量控制體系，對疏風(fēng)解毒膠囊質(zhì)量標準進(jìn)行了全面的提升。

4.組方特點(diǎn)、配伍合理性及比較優(yōu)勢研究

（1）組方特點(diǎn)、配伍合理性研究

①基于網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)的元胡止痛滴丸配伍合理性研究

化學(xué)物質(zhì)基礎和作用機理研究表明，元胡止痛滴丸對原發(fā)性痛經(jīng)具有明顯的鎮痛作用，其發(fā)揮鎮痛作用的主要藥效物質(zhì)基礎為生物堿類(lèi)和香豆素類(lèi)成分。本部分采用網(wǎng)絡(luò )藥理學(xué)的方法闡釋元胡止痛滴丸配伍合理性，選取元胡止痛滴丸中君藥延胡索藥材的生物堿類(lèi)代表性成分延胡索乙素、巴馬汀、d-海罌粟堿和原阿片堿，及白芷藥材的兩個(gè)香豆素類(lèi)代表性成分歐前胡素和異歐前胡素，進(jìn)行潛在靶點(diǎn)和作用通路的預測，得到“化合物-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò )藥理圖（圖18）。

通過(guò)分析試驗數據發(fā)現，以延胡索乙素、巴馬汀、海罌粟堿、原阿片堿為代表的生物堿類(lèi)化合物可以單獨作用于與中樞鎮痛相關(guān)的9個(gè)蛋白靶點(diǎn)和9條信號通路，通過(guò)調節神經(jīng)鎮痛介質(zhì)而發(fā)揮治療痛經(jīng)的作用。以歐前胡素和異歐前胡素為代表的香豆素類(lèi)成分可單獨作用于與性激素、炎癥以及痙攣關(guān)系密切的9個(gè)蛋白靶點(diǎn)和2條信號通路，通過(guò)調節性激素的分泌與釋放，抑制炎癥因子的表達，緩解平滑肌痙攣而起到治療原發(fā)性痛經(jīng)的作用。同時(shí)，6個(gè)化合物還共同作用于涉及免疫反應、炎癥表達、平滑肌痙攣以及性激素調節等相關(guān)的5個(gè)蛋白靶點(diǎn)和8條信號通路。

（紅色圖形表示生物堿和香豆素共同作用的靶點(diǎn)及通路；黃色圖形表示生物堿單獨作用的靶點(diǎn)及通路；藍色表示香豆素單獨作用的靶點(diǎn)及通路）

圖18 元胡止痛滴丸代表成分網(wǎng)絡(luò )藥理圖

結果表明，元胡止痛滴丸中生物堿和香豆素兩類(lèi)成分既有共同的作用靶點(diǎn)群及通路群，又各有偏重，作用通路涉及中樞鎮痛、激素調節、解痙、血管舒張、炎癥及免疫等各個(gè)環(huán)節，各通路群間通過(guò)共有靶點(diǎn)連接，顯示出不同成分間的多靶點(diǎn)、多途徑的協(xié)同作用。

②基于鎮痛藥效學(xué)模型的元胡止痛滴丸配伍合理性研究

a.對小鼠熱板模型的影響：與模型組比較，元胡止痛滴丸可顯著(zhù)延長(cháng)藥后0.5h、1h、2h、3h熱刺激致小鼠舔足反應的潛伏期，并可持續到藥后3h，延長(cháng)率最高可達36.8%；延胡索提取物可顯著(zhù)延長(cháng)藥后0.5h、1h、2h熱刺激致小鼠舔足反應的潛伏期，并可持續到藥后2h，延長(cháng)率最高可達27.5%；白芷提取物對熱刺激致小鼠舔足反應的潛伏期基本無(wú)影響。試驗結果表明，元胡止痛滴丸發(fā)揮中樞鎮痛作用的有效部位在延胡索提取物。采用金氏概率相加法計算Q值，結果顯示各時(shí)間點(diǎn)Q值均大于1，說(shuō)明延胡索提取物和白芷提取物比例為2:1配伍對小鼠熱板反應所致的疼痛潛伏期具有協(xié)同增效作用。

b.對小鼠醋酸扭體模型的影響：與模型組比較，元胡止痛滴丸、延胡索提取物和白芷提取物均可非常顯著(zhù)的減少醋酸扭體反應的扭體次數，抑制率分別可達58.6%、34.3%、35.7%�？梢�(jiàn)元胡止痛滴丸、延胡索提取物、白芷提取物對化學(xué)刺激引起的疼痛均有明顯的鎮痛作用。采用金氏概率相加法計算Q值，結果顯示Q值大于1，說(shuō)明延胡索提取物和白芷提取物比例為2:1配伍對小鼠扭體次數具有協(xié)同增效作用。

c.對大鼠痛經(jīng)模型的影響：與模型組比較，元胡止痛滴丸、延胡索提取物和白芷提取物能夠顯著(zhù)延長(cháng)痛經(jīng)模型大鼠扭體反應的潛伏期，潛伏期延長(cháng)率分別為73.3%、22.7%、39.8%。采用金氏概率相加法計算扭體反應的潛伏期Q值，結果顯示Q值為1.370，說(shuō)明延胡索提取物和白芷提取物比例為2:1配伍對縮宮素所致大鼠痛經(jīng)疼痛潛伏期具有協(xié)同增效作用。

與模型組比較，元胡止痛滴丸、延胡索提取物和白芷提取物能夠顯著(zhù)減少扭體次數，扭體次數抑制率分別為73.7%、53.7%、42.9%。采用金氏概率相加法計算扭體次數Q值，結果顯示Q值為1.002，說(shuō)明延胡索提取物和白芷提取物比例為2:1配伍對縮宮素所致大鼠痛經(jīng)止痛具有協(xié)同增效作用。

與模型組比較，元胡止痛滴丸和延胡索提取物可顯著(zhù)升高β-EP含量，顯著(zhù)降低5-HT、NA含量，白芷提取物可顯著(zhù)降低5-HT含量，對β-EP、NA含量基本無(wú)影響。采用金氏概率相加法計算血漿中β-EP、5-HT和NA 的Q值，Q值分別為1.30、0.79、1.17，說(shuō)明延胡索提取物和白芷提取物比例為2:1配伍對縮宮素所致大鼠痛經(jīng)模型血管活性物質(zhì)β-EP和NA具有協(xié)同增效作用。

元胡止痛滴丸和延胡索提取物可顯著(zhù)降低PGF2α含量及PGF2α/ PGE2比值，顯著(zhù)升高PGE2含量，白芷提取物對PGF2α、PGE2及PGF2α/ PGE2比值基本無(wú)影響。采用金氏概率相加法計算血漿中PGF2α、PGE2和PGF2α/ PGE2 Q值，Q值分別為0.96、1.22、0.93，說(shuō)明延胡索提取物和白芷提取物比例為2:1配伍對縮宮素所致大鼠痛經(jīng)PGE2具有協(xié)同增效作用。

d.對未孕大鼠離體子宮平滑肌運動(dòng)的影響

元胡止痛滴丸、延胡索提取物、白芷提取物均能明顯降低縮宮素或PGF2α引起子宮收縮的頻率、平均振幅和活動(dòng)力，并呈現劑量依賴(lài)性。金氏概率相加法計算活動(dòng)力Q值，表明延胡索和白芷提取物按2:1比例配伍對縮宮素或PGF2α引起的子宮收縮具有協(xié)同作用。

延胡索乙素、歐前胡素及兩者合用（1：1）均能明顯降低縮宮素或PGF2α引起子宮收縮的頻率和活動(dòng)力，并呈現劑量依賴(lài)性。金氏概率相加法計算活動(dòng)力Q值，表明二者按1:1比例配伍對縮宮素引起的子宮收縮具有協(xié)同作用。

e.對大鼠原代子宮平滑肌細胞鈣內流的影響

延胡索提取物、白芷提取物及兩者合用對子宮平滑肌細胞Ca2+內流的影響：各加藥組均能有效抑制細胞內Ca2+增加，且兩者合用組的平均熒光強度增加最少，對Ca2+內流的抑制作用最強，優(yōu)于延胡索提取物、白芷提取物單獨使用。

延胡索乙素、歐前胡素及兩者合用對子宮平滑肌細胞Ca2+內流的影響：各給藥組能有效抑制細胞內Ca2+增加，且延胡索乙素、歐前胡素合用組的平均熒光強度增加最少，對Ca2+內流的抑制作用最強，優(yōu)于延胡索乙素、歐前胡素單獨使用。

元胡止痛滴丸、延胡素提取物、白芷提取物含藥血清對子宮平滑肌細胞Ca2+內流的影響：藥血清能有效抑制細胞內Ca2+增加，且元胡止痛滴丸含藥血清組的平均熒光強度增加最少，對Ca2+內流的抑制作用最強，優(yōu)于延胡索提取物含藥血清、白芷提取物含藥血清單獨使用。

③基于G蛋白偶聯(lián)受體的元胡止痛滴丸配伍研究

本研究以6個(gè)GPCR受體（5-羥色胺受體，5-HT1A、阿片受體，OPRM1、β2腎上腺素受體，ADRB2、多巴胺受體，D2、乙酰膽堿受體，M2、和血栓素-前列腺素受體，TP）為研究對象，通過(guò)運用胞內鈣離子熒光技術(shù)檢測延胡索藥材、白芷藥材、二者配伍給藥以及延胡索乙素、歐前胡素、二者配伍給藥后對5-HT1A、OPRM1和ADRB2受體的激動(dòng)作用以及對D2、M2和TP受體的抑制作用，從而揭示元胡止痛滴丸的作用機制，并在功能受體層面探究元胡止痛滴丸的配伍合理性。

與空白對照組比較，延胡索和白芷藥材配伍給藥后可以激動(dòng)5-HT1A、OPRM1、ADRB2受體，抑制D2、M2和TP受體，從而調節一系列的下游生物信號轉導效應，發(fā)揮多種生物活性，體現了二者配伍給藥的多靶點(diǎn)多途徑作用特點(diǎn)。并且二者配伍給藥后對5-HT1A、OPRM1、ADRB2受體的激活作用和對D2、M2和TP受體的抑制作用均明顯強于兩味藥材單獨給藥，且具有統計學(xué)差異，表明二者配伍后有顯著(zhù)的增效作用。單體配伍實(shí)驗表明，延胡索乙素單獨給藥后可以激動(dòng)ADRB2受體，拮抗D2和TP受體；歐前胡素可拮抗TP受體。而二者配伍后對ADRB2的激動(dòng)作用以及對D2、TP受體的拮抗作用均顯著(zhù)強于單獨給藥，體現配伍后的增效作用。

④基于藥代動(dòng)力學(xué)的元胡止痛滴丸配伍合理性研究

與延胡索提取物單獨給藥相比，延胡索-白芷組方配伍后延胡索甲素、延胡索乙素及原阿片堿在大鼠體內的吸收增加，達峰濃度Cmax和AUC0→∞均顯著(zhù)升高；與白芷提取物單獨給藥相比，組方配伍后歐前胡素、異歐前胡素的達峰濃度有所降低，但吸收延緩、滯留時(shí)間延長(cháng)。結果表明，延胡索與白芷配伍存在明顯的體內動(dòng)力學(xué)相互作用。見(jiàn)圖19。

與單獨給藥相比，延胡索-白芷組方配伍能顯著(zhù)升高延胡索甲素、延胡索乙素和原阿片堿在腦組織中的達峰濃度，增加其腦組織分布量，同時(shí)延長(cháng)歐前胡素和異歐前胡素在腦組織中的平均駐留時(shí)間。文獻報道延胡索甲素、延胡索乙素、原阿片堿、歐前胡素及異歐前胡素均不是P-gp的底物，結合血漿藥代研究結果分析，抑制體內代謝酶活性而對藥物吸收過(guò)程的影響可能是引起延胡索與白芷配伍后各效應成分腦組織分布改變的主要因素。見(jiàn)圖20。

總結，本研究通過(guò)整合整體動(dòng)物、器官水平、細胞、受體、藥代動(dòng)力學(xué)和網(wǎng)絡(luò )藥理等多角度的實(shí)驗結果發(fā)現，延胡索中的生物堿類(lèi)成分可通過(guò)作用于中樞鎮痛相關(guān)蛋白、平滑肌相關(guān)受體蛋白以及血栓素、血管緊張素等靶點(diǎn)蛋白來(lái)調節下游生物信號轉導通路，從而發(fā)揮止痛、理氣、活血等功效，起到君藥的作用。白芷藥材同樣可以通過(guò)與5-羥色胺、乙酰膽堿、前列腺素血栓素等受體結合，參與痙攣、炎癥等相關(guān)信號通路的調節與轉導，從而發(fā)揮行氣血的功效，輔助君藥延胡索加強治療，起到臣藥作用，體現了二者配伍的合理性。

（2）藥效比較優(yōu)勢研究

選用小鼠熱板、小鼠醋酸扭體和大鼠痛經(jīng)模型，對元胡止痛滴丸與月月舒（痛經(jīng)寶顆粒）進(jìn)行鎮痛作用對比研究，挖掘元胡止痛滴丸治療痛經(jīng)的臨床優(yōu)勢。

①小鼠熱板試驗：與模型組比較，元胡止痛滴丸可顯著(zhù)延長(cháng)藥后0.5h、1h、2h、3h熱刺激致小鼠舔足反應的潛伏期，并可持續到藥后3h，延長(cháng)率最高可達36.8%；月月舒在藥后1h、2h、3h可顯著(zhù)延長(cháng)熱刺激致小鼠舔足反應的潛伏期，延長(cháng)率最高可達33.6%。與陽(yáng)性藥月月舒比較，元胡止痛滴丸在藥后0.5h的鎮痛作用優(yōu)于月月舒，表明元胡止痛滴丸具有起效早的特點(diǎn)。

②小鼠扭體試驗：與模型組比較，元胡止痛滴丸和月月舒均可非常顯著(zhù)的減少醋酸扭體反應的扭體次數，抑制率分別可達58.6%、29.5%；與陽(yáng)性藥月月舒比較，元胡止痛滴丸鎮痛作用優(yōu)于月月舒。

③大鼠痛經(jīng)試驗：與模型組比較，元胡止痛滴丸和月月舒能夠顯著(zhù)延長(cháng)痛經(jīng)模型大鼠扭體反應的潛伏期，潛伏期延長(cháng)率分別為73.3%、34.1%。與陽(yáng)性藥月月舒比較，元胡止痛滴丸延長(cháng)痛經(jīng)模型大鼠扭體反應的潛伏期的作用優(yōu)于月月舒，表明元胡止痛滴丸具有起效早的特點(diǎn)。

與模型組比較，元胡止痛滴丸和月月舒能夠顯著(zhù)減少扭體次數，扭體次數抑制率分別為73.7%、46.3%。與陽(yáng)性藥月月舒比較，元胡止痛滴丸減少扭體次數的作用優(yōu)于月月舒，表明元胡止痛滴丸治療痛經(jīng)的鎮痛強度優(yōu)于月月舒。

與模型組比較，元胡止痛滴丸和延胡索提取物可顯著(zhù)升高β-EP含量，顯著(zhù)降低5-HT、NA含量，與陽(yáng)性藥月月舒比較，元胡止痛滴丸可顯著(zhù)升高β-EP含量，顯著(zhù)降低5-HT含量，表明元胡止痛滴丸具有治療痛經(jīng)作用靶點(diǎn)更全面的特點(diǎn)。

元胡止痛滴丸可顯著(zhù)降低PGF2α含量及PGF2α/ PGE2比值，顯著(zhù)升高PGE2含量，月月舒對PGF2α、PGE2及PGF2α/ PGE2比值基本無(wú)影響。與陽(yáng)性藥月月舒比較，元胡止痛滴丸可顯著(zhù)降低PGF2α含量及PGF2α/ PGE2比值，顯著(zhù)升高PGE2含量，表明元胡止痛滴丸具有治療痛經(jīng)作用靶點(diǎn)更全面的特點(diǎn)。

 

作者介紹

張鐵軍，男，研究員，享受政府特貼專(zhuān)家，天津市授銜專(zhuān)家，全國優(yōu)秀科技工作者。

主要從事中藥新藥研究和中藥資源研究工作。

承擔國家項目15項；天津市項目12項；研制中藥新藥20余項；第一發(fā)明人申報專(zhuān)利50項，授權30項；主編著(zhù)作8部、參編15部，發(fā)表論文170余篇。獲國家“八五”重大科技成果獎1項，國家科技進(jìn)步一等獎1項，國家中醫藥管理局科技進(jìn)步一等獎1項；天津市科技進(jìn)步一等獎1項、二等獎2項等多項獎勵。